Listeria monocytogenes 200

Numer katalogowy: AML-Lm-200

Stan magazynowy: 0 szt.

Stan produktu: Nowy

Zapytaj o produkt Poleć znajomemu Specyfikacja PDF

Opis produktu
Recenzje produktu (0)

Ampli-LAMP Listeria monocytogenes KIT

Zestaw odczynników do identyfikacji materiału genetycznego bakterii z rodzaju Listeria monocytogenes techniką izotermalnej amplifikacji DNA (LAMP).

Przeznaczenie testu:

Pałeczki Listeria monocytogenes należą do Gram-dodatnich bakterii wywołujących liczne zakażenia u ludzi oraz zwierząt. Patogeny te są rozpowszechnione w środowisku i bardzo często są przenoszone przez żywność, powodując zatrucia pokarmowe. Bakterie Listeria monocytogenes są w stanie rozwijać się w warunkach tlenowych lub beztlenowych. Namnażają się one w temperaturze od 0.4° do 50° C, zasiedlając środowisko o bardzo różnym zakresie pH (4.4-9.4). Niezmiernie problematyczne jest także to, że pałeczki Listeria monocytogenes są odporne na małe dawki konserwantów i środków myjących oraz niewystarczający okres pasteryzacji i mrożenia. Dawka zakaźna niezbędna do wywołania objawów chorobowych u ludzi i zwierząt, w zależności od szczepu Listeria monocytogenes waha się od 102?103 komórek bakteryjnych. Dotychczasowe metody wykrywania tych Gram-dodatnich pałeczek są praco i czasochłonne. Nasz test pozwala na skrócenie czasu rozpoznania patogennych bakterii z rodzaju Listeria monocytogenes. Opiera się on na jakościowej detekcji DNA tych pałeczek.

W zależności od wielkości, zestaw pozwala na przeprowadzenie 200 i 400 testów.

Zestaw zawiera:

Isothermal Master Mix fluorescent dye, (bufor reakcyjny, MgCl2, dNTPs, pirofosfataza, polimeraza GspSSD, barwnik fluorescencyjny ? pochodna 6?FAM)
primers mix (F3, B3, FIP, BIP, LF, LB każdy w stężeniu [10 ?M])
kontrolę pozytywną DNA
sterylną wodę MiliQ do reakcji.

Zasada działania testu:

Test oparty jest na technice LAMP (ang. Loop-mediated Isothermal Amplification) i zapewnia bardzo szybką oraz wysoce specyficzną identyfikację materiału genetycznego bakterii Listeria monocytogenes. Zoptymalizowane mieszaniny i specjalnie zaprojektowane startery umożliwiają specyficzną amplifikację genu kodującego listeriolizynę.
Czas potrzebny na przeprowadzenie reakcji to ok. 30 minut w przypadku wykorzystania standardowego termocyklera oraz 10-20 minut w przypadku termocyklera do Real-time PCR lub platformy Genie II. Test oparty o metodę amplifikacji LAMP jest co najmniej dwukrotnie szybszy od testu opartego o standardową amplifikację PCR.

W zależności od urządzenia wykorzystanego do przeprowadzenia testu, różni się sposób analizy wyników testu:

PLATFORMA	SPOSÓB ANALIZY WYNIKÓW
Łaźnia wodna Blok grzewczy Termocykler do PCR	Rozdział elektroforetyczny w 2% żelu agarozowym
Łaźnia wodna Blok grzewczy Termocykler do PCR	Obserwacja fluorescencji w probówce w świetle UV Analiza turbidymetryczna ? obserwacja zmętnienia roztworu w probówce po reakcji LAMP
Termocykler do Real-time PCR Platforma Genie II do LAMP	Analiza przyrostu ilości produktu w czasie rzeczywistym, na podstawie pomiaru fluorescencji (odczyt przez kanał FAM) Analiza profilu topnienia produktu po reakcji LAMP

Produkt reakcji wybarwiony bromkiem etydyny w żelu agarozowym ma postać tzw. drabinki (ang. ladder-pattern structure), ponieważ w wyniku reakcji LAMP powstają różnej długości konkatamery złożone z powtórzeń sekwencji matrycowej. Wynik pozytywny reakcji można również zaobserwować w postaci silnej fluorescencji produktów reakcji w świetle UV lub w postaci zmętnienia roztworu w probówce po reakcji (analiza turbidymetryczna).

Wynik pozytywny reakcji przeprowadzonej w termocyklerze do Real-time PCR oraz na platformie Genie II umożliwia analizę przyrostu ilości produktu w czasie rzeczywistym (proporcjonalnie do wzrostu emisji fluorescencji, odczytywanej przez kanał FAM).

Możliwa jest również analiza specyficzności reakcji na podstawie profilu topnienia produktów amplifikacji (ang. melt curve analysis). W analizie Melt Peak widoczny jest jeden specyficzny produkt reakcji, który topnieje w zakresie temp. 86 ? 87°C.
UWAGA: Zaleca się prowadzenie analizy wyników testu w układzie zamkniętym (wizualizacja w świetle UV lub na podstawie analizy profilu topnienia produktów reakcji).

Zawartość zestawu Ampli-LAMP Listeria monocytogenes

Lp.	Element zestawu	AML-SLM-200	AML-SLM-400
[1]	Isothermal Master Mix	2 szt.	4 szt.
[2]	Ampli-LAMP Listeria monocytogenes Primers Mix	1 szt.	2 szt.
[3]	Ampli-LAMP Listeria monocytogenes Positive Control	1 szt.	1 szt.
[4]	MiliQ Water	1 szt.	1 szt.

Warunki przechowywania

przechowywanie długoterminowe: -20°C
przy częstym, rutynowym użyciu: +4°C
chronić przed światłem
unikać częstego zamrażania i rozmrażania.

Zalecana procedura przed analizą LAMP

Zalecamy przeprowadzenie 10-12 h hodowli wstępnej na pożywce Half Frazer broth, co znacznie podwyższa czułość analityczną całej metody. Po namnażaniu wstępnym konieczne jest prowadzenie ekstrakcji DNA.

PRZEPROWADZENIE TESTU AMPLI-LAMP Listeria monocytogenes

Warunki reakcji:
STANDARD PCR

Etap	Temperatura	Czas	Ilość cykli
Amplifikacja	65°C	30 min	1
Chłodzenie	4°C	1 min

REAL-TIME PCR

Etap	Temperatura	Czas	Ilość cykli
Amplifikacja	65°C	30 sek	70
Pomiar fluorescencyjny ilości produktu amplifikacji po każdym cyklu reakcji, w czasie rzeczywistym
Topnienie produktu	65 ? 98°C	0,5°C / 5 sek
Pomiar fluorescencji po każdorazowej zmianie temp. o 0,5°C
Chłodzenie	4°C	30 sek

Przygotowanie mieszaniny reakcyjnej

Lp.	Element zestawu	Objętość na 1 reakcję
[1]	Isothermal Master Mix	7,5 ?l
[2]	Ampli-LAMP Listeria monocytogenes Primers Mix: Primer F3/B3 [10 ?M] 0,5 ?l Primer FIP/BIP [10 ?M] 2 ?l Primer LF/LB [10 ?M] 1 ?l	3,5 ?l
[3]	Ampli-LAMP Listeria monocytogenes Positive Control lub inna matryca DNA	1 ?l
[4]	Ampli-LAMP Listeria monocytogenes MiliQ Water	1 ?l
	Razem	13 ?l

Obligatoryjne kontrole testu Ampli-LAMP Listeria monocytogenes

Dla prawidłowej interpretacji wyników testu należy obok próbek badanych zastosować trzy kontrole reakcji:

kontrolę pozytywną reakcji (Positive Control), która pozwala ocenić poprawność przebiegu amplifikacji docelowego produktu ? matrycę stanowi próbka zawierająca amplifikowaną sekwencję DNA [3].
kontrolę negatywną reakcji, która pozwala ocenić poprawność przebiegu amplifikacji ? matrycę stanowi izolat DNA ze zdrowej tkanki zwierzęcej.
kontrolę negatywną reakcji bez matrycy DNA, która pozwala ocenić czystość odczynników używanych do reakcji amplifikacji LAMP ? zamiast matrycy, woda MiliQ [4].

Fakultatywnie kontrole testu Ampli-LAMP Listeria monocytogenes
Okresowo zaleca się przeprowadzić:

kontrolę negatywną izolacji DNA ? pozwala ocenić czystość odczynników do izolacji. Należy wykonać jedną taką kontrolę w każdej serii izolacji lub okresowo w krótkich odstępach czasu, izolując z wody (zamiast z zainfekowanej tkanki).
kontrolę pozytywną izolacji ? pozwala potwierdzić skuteczność procesu izolacji. Należy stosować okresowo np. dla nowej partii odczynników do izolacji DNA (do izolacji należy podać tkankę naturalnie lub sztucznie zainfekowaną bakterią).

Nr kat. produktów:
-AML-Lm-200 (200 reakcji)
-AML-LM-400 (400 reakcji)

Nikt jeszcze nie napisał recenzji do tego produktu. Bądź pierwszy i napisz recenzję.

Napisz recenzję

Pozostałe produkty z kategorii